有人说CCK8测细胞增殖这个实验唯一的难点是你得有CCK8这个试剂盒
那么这个有手就行的实验，为什么有时候还是做不好呢？
从原理，步骤，注意事项和应用，大家看我这一篇就够了。
原理：CCK8是cell counting kit-8的简写，也就是细胞计数试剂盒。CCK8可以用于细胞数测定、细胞活性、细胞增殖/***性检测。优点是灵敏、价格便宜、速度快、要求低（只要有酶标仪就能测）。
图1：WST-8和WST-8 formazan结构（图片来源于Abclonal CCK8试剂盒说明书）
原理：利用WST-8在电子耦合试剂存在的条件下，可以被线粒体里的脱氢酶还原产生棕***的formazan。然后就可以用OD450测吸光度了。OD450数值越大，颜色越深，说明细胞活性越强，细胞数量越多，或者细胞***性越小。
CCK8法测定细胞增殖实验的步骤（以Abclonal的试剂盒为例，小编一直用的挺好的）：
96孔板接种体积为100μL的5x10∧3个细胞，37℃，5%CO2培养24小时。
2/ 加入10μL浓度梯度稀释的要检测的物质（常见的就是测药物的细胞***性）。培养不同时间（药物处理不同时间的***性是不一样的）。
3/ 每个孔里面加10μL的CCK-8溶液。加的时候有2种方法。一是直接吸10μL加到每个孔里；二是配含有10%CCK-8溶液的培养基，把96空板里的培养基弃掉，换成含有10%CCK-8的培养基。注意这里要做空白对照，就是单纯培养基里（不铺细胞）也要加10μL的CCK-8溶液。因为培养基也能测出来OD450，所有实验组的OD值最后都要减掉这个对照组培养基的OD值的。
4/ 孵育1-4小时，酶标仪检测OD450。
5/ 数据处理：存活率（或者叫细胞活性之类的）=（实验组OD450-培养基OD450）/（对照组OD450-培养基OD450）x100%
注意事项：
1/ 第一步铺细胞的数量要具体问题具体分析了，有些细胞体积大就少铺点，有些细胞体积小就多铺点。铺细胞前一定要混匀，或者铺到孔里之后再晃匀。
2/ 加CCK-8溶液的时候不能有气泡，有气泡可以用热的针头烫破。气泡会影响OD值。
3/ 孵育的时间要重点注意，最好先做个预实验。因为真的很容易overload（数值超过4就overload了）然后拿不到数据。敷育时间一般不会超过2小时，期间可以观察下液体颜色变化情况，不要等颜色很深了再去测。
4/ 如果要测好几个时间点的话，那每一组加完CCK8孵育的时间都要严格一致。因为孵育的时间越长，颜色越深，OD450也会越大。即便细胞活性低，孵育时间长了之后，也会和细胞活性高的组测出来一样的数据。
5/ 建议多做几个重复，可以做5个重复。因为难免有些孔会翻车，数值偏离平均值太多，增加重复孔数量的话，即便有1-2个孔数值明显不对，弃掉就可以了，这样就不用重新做一遍。但凡看到此类试剂盒说明书让你做3个重复的，水平你懂得。
6/ 检测某些开盖后容易氧化的物质，如果要测处理不同时间点的话，建议分成几块不同的板做。
7/ 来不及测的话（大概率是别人长时间占用酶标仪），可以加10μL1%的SDS或者0/1 M HCL（加SDS比较方便，HCL是管控的取用还要登记啥的。）终止反应。室温放24小时吸光度都不会变。
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