小编之前的文章已经讲解了luciferase reporter系统在筛选干扰素调节基因中的应用，阅读这篇之前也可以先去回顾一下。原理很简单，就是把启动子序列***到Firefly luciferase之前，用感兴趣的启动子去启动Firefly luciferase的表达。如下图，想要研究IFNa或者IFNβ的表达调控，就把IFNa或者IFNβ的启动子***到Firefly luciferase之前，内参就是用TK基因的启动子启动Renillaluciferase的表达。
图1：荧光素酶报告原理（Rachael Kenworthy et al/ 2009/Nucleic Acids Res）
小编今天讲的是怎么用荧光素酶报告系统（Luciferase reporter）研究基因的启动子和转录因子调控。以下面这篇文章为例，便于理解。
背景：已知Transmembrane protein 174 (TMEM174) 是一个Ⅲ型跨膜蛋白，TMEM174在***脏中的高表达，通过促进细胞增殖诱发***癌。这篇文章的目的是研究细胞是怎么在转录水平上调控TMEM174这个基因的表达的。
于是，作者从全血DNA中扩增了TMEM174的启动子和第一个内含子，***到pGL3-basic载体中。想要pGL3-basic载体的私信小编。
图2：pGL3-basic质粒图谱多***区
通过双荧光素酶报告方法检测发现：-2/500到+1bp，-1000到+674，-700到+674和-186到+674的启动子的活性较高，活性最高启动子区域是-186到+674。活性最低的启动子区域是-890到+674和-466到+674。
图3：TMEM174基因启动子构建和双荧光素酶报告基因检测（Fen Hu/ et al/ 2013/ Exp Ther Med）
找到了活性最高的调控TMEM174基因表达的启动子区域，下一步就是找到调控TMEM174基因表达的转录因子，也就是结合TMEM174基因启动子的蛋白。已知CREB和AP-1与细胞增殖有关，于是作者用EMSA实验验证了CREB和AP-1能够结和TMEM174基因的启动子。下图第3泳道用了CREB竞争性探针减弱了CREB和TMEM174启动子的结合，但第5泳道里的AP-1竞争性探针不能抑制AP-1和TMEM174启动子的结合，说明CREB是特异性结合TMEM174启动子，而AP-1是非特异性结合TMEM174启动子。
全文就这点东西，双荧光报告+EMSA，简单粗暴，做完直接毕业，爽歪歪。
图4：CREB和AP-1的结合活性（Fen Hu/ et al/ 2013/Exp Ther Med）
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