试剂：
配制总体积为1L的STE Buffer：
250 mM蔗糖= 85/58g/l
5 mM Tris = 0/606 g/l
2 mM EGTA = 0/76 g/l
溶解于4˚C的ddH2O中，用2M***调pH至7/4，置于冰上
步骤：
1/在3 x 500 cm2的***培养板中培养细胞至85-95%的密度。
2/吸掉所有的培养基。
3/用30 mL冷的STE清洗细胞单层，弃掉所有STE。
4/用30mL冷的STE第二次洗涤弃掉。
5/用干净的刀片从平板表面刮下单层细胞。
6/将刮下来的细胞重新悬浮在5ml冷的STE中，然后转移到50ml离心管中。重复两次。
7/对所有***培养板重复步骤2-6，将所有细胞并入到一个离心管中。
8/ 4˚C，2000rpm离心10 min。
9/ 小心地吸出上清液，并保留细胞沉淀。
10/将细胞沉淀重悬在3/5 mL含蛋白酶***的3/5 mL冷的STE中，并将0/5%无脂肪酸BSA转移到冷的7ml玻璃均浆器中。用1/5 ml含0/5%无脂肪酸牛血清白蛋白的STE清洗试管，然后转移到匀浆器中。
11/通过“紧”柱塞10次使细胞均浆化，并将匀浆转移到50毫升的离心管中。如果需要的话，加上冰。
12/在4˚C（1管）下以3000 rpm离心匀浆3 min。
13/将上清液通过双层湿细布过滤，在4˚C（2管）下以10000 rpm离心11 min。
14/ 倒出上清液，擦拭试管内壁。
15/ 用冷的STE中重悬线粒体沉淀，并转移到一个新的15ml的离心管中。加入冰的STE，以11600G离心10分钟。
16/重新悬浮线粒体沉淀。
17/ 将线粒体置于冰上。
图1：细胞培养物中分离线粒体步骤
预期产量：3 x 500 cm2的85%细胞密度的预期产量约为400-600uL中含有15-25mg的线粒体蛋白
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